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293T，HEK-293T，人(ren)胚腎細胞

Human Embryonic Kidney 293T

產品貨號：JY03041      規(gui)格：> 1×10? cells（T25瓶/1mL凍(dong)存管）     銷售(shou)價格(ge)：￥ 600

293T 說明書.pdf

細(xi)胞簡介

人胚腎細胞株293插入SV40 T-抗原基因后產生的(de)高轉染效率的(de)衍生株稱為(wei)293T。該細胞(bao)最初(chu)的名字293tsA1609neo，攜帶SV40復制序(xu)列，被廣泛用于逆轉錄病毒生(sheng)產、基因表達和(he)蛋白表達。

運輸和保存

1．1 mL凍存管包裝干冰運輸，收貨(huo)后-80℃冰箱保存過(guo)夜后轉入液氮或(huo)直(zhi)接復蘇(su)。若發現干冰已經揮發干凈、凍存管蓋脫落(luo)、破損及(ji)細胞有污染(ran)，請立即與我(wo)們聯系。

2．T25瓶培養(yang)的細胞常溫發貨，收(shou)(shou)到后(hou)(hou)按照細胞接收(shou)(shou)后(hou)(hou)的處理方法操作。

培養瓶(ping)細胞接收后的處理

1．收(shou)到細胞后，75%酒精消(xiao)毒瓶壁，拆下(xia)封口膜，放入37℃，5% CO₂培養(yang)箱(xiang)中靜(jing)置3-4 h，以穩定(ding)細胞狀態。若發(fa)現培養瓶(ping)破損、有液體溢出及細胞有污染(ran)，請拍照后及時聯系(xi)我(wo)們。

2．請在顯微鏡下(xia)確認細(xi)(xi)胞狀態，同時給剛收到的細(xi)(xi)胞拍照，10倍和20倍各2-3張以及培(pei)養瓶外觀照片一張留(liu)存(cun)，作(zuo)為售后(hou)依據。

3．細(xi)胞(bao)收貨脫落：293T細(xi)胞(bao)貼壁能力(li)弱，收貨如有大面積脫落的細(xi)胞(bao)團為正常現象。若細胞(bao)在快遞運輸途中因振動脫落，先將培養瓶(ping)放入37℃，5%CO₂培養箱中靜置(zhi)3-6 h，讓少數(shu)脫落(luo)的(de)細(xi)胞可再(zai)附著生長。若仍有脫落(luo)聚集的(de)細(xi)胞，則(ze) (1) 收集所有細胞懸(xuan)液，1000 rpm離(li)心5 min，保留沉淀；(2) 添加胰蛋白酶消化液0.5 mL至離心管中，重懸沉(chen)淀，置于(yu)37℃消化(hua)1-2 min左(zuo)右；(3) 向離心管內加入5 mL完(wan)全培(pei)養基終止消化；(4) 1000 rpm，離心5 min，丟棄上(shang)清，用5 mL完全培養基(ji)（補加1-5% FBS，促進貼壁）重懸沉淀，接種(zhong)于新(xin)的培養瓶(ping)內；(5) 待細胞完全貼壁后，培養觀察；之后按(an)照(zhao)換液頻率更換新(xin)鮮的完全培養基。

4．收貨細胞的培(pei)養和傳代：在顯微鏡下觀察(cha)細胞生長(chang)狀態，若細胞生長(chang)密度在60%以下，可去(qu)除培養瓶中(zhong)(zhong)的灌液(ye)培養基，加入新配制的完全培養基，置(zhi)于培養箱中(zhong)(zhong)繼續培養。若(ruo)細胞生長密(mi)度達80%-90%以上，可(ke)以對(dui)細胞進行傳代處理。

5．運輸用(yong)的(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基（灌液(ye)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)）不(bu)能再用(yong)來培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)細(xi)(xi)胞，請(qing)換用(yong)合適的(de)新鮮培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基來培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)細(xi)(xi)胞。

凍存細胞接收后(hou)的處(chu)理

收貨(huo)后-80℃冰(bing)箱保存過夜后(hou)轉入液氮或(huo)直接(jie)復蘇(su)。

細胞復蘇：將(jiang)含有1 mL細(xi)胞懸液的凍存管置(zhi)于37℃水浴中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解凍，回溫后(hou)噴以75 %酒精并擦拭之(zhi)，移(yi)入(ru)無菌操作(zuo)臺(tai)內。將(jiang)凍存管中細胞加入(ru)到含4-6 mL完全培(pei)養(yang)基的離心管中混合均勻。1000 rpm離心3-5 min，棄(qi)去(qu)上清液，完全培養基(ji)重懸細胞(bao)。然后將細胞(bao)懸液加入培養瓶/培養皿中，培養箱(xiang)中孵育。第二天顯微鏡下(xia)觀察細胞(bao)生(sheng)長情況(kuang)和細胞(bao)密度。

培養信息

293T培養(yang)注意事項(xiang)

1．293T貼壁能力較(jiao)弱，加液(ye)、換(huan)液(ye)、洗滌時，須動作輕柔，避免用液(ye)體(ti)直沖(chong)細(xi)(xi)胞，會(hui)造成細(xi)(xi)胞脫(tuo)(tuo)落(luo)。細(xi)(xi)胞生長不(bu)能過密，過密細(xi)(xi)胞容易脫(tuo)(tuo)落(luo)，脫(tuo)(tuo)落(luo)下來的細(xi)(xi)胞可(ke)以(yi)通過離(li)心收集，使用胰酶消化后繼續培養(yang)。

2．293T細胞(bao)(bao)(bao)(bao)狀(zhuang)態(tai)直接影響(xiang)病(bing)毒(du)包裝效率。當細胞(bao)(bao)(bao)(bao)傳代次(ci)數(shu)過多、細胞(bao)(bao)(bao)(bao)增(zeng)殖(zhi)速度(du)減緩、細胞(bao)(bao)(bao)(bao)貼壁能力非常弱（輕(qing)柔換(huan)液也(ye)能導致細胞(bao)(bao)(bao)(bao)半數(shu)脫落）時，說明細胞(bao)(bao)(bao)(bao)狀(zhuang)態(tai)不好，會大幅降低病(bing)毒(du)包裝效率。

3．使用高糖(tang)DMEM培養293T，低(di)糖DMEM或者DMEM/F12等含糖量(liang)低(di)的培養(yang)基可能(neng)影響293T細胞(bao)的生長(chang)狀(zhuang)態(tai)。

4．如果發(fa)生293T細胞不貼壁(bi)，漂(piao)浮(fu)在培(pei)養基中(zhong)的(de)現象，請確認所使(shi)用(yong)的(de)DMEM中碳酸氫鈉(na)濃度及培養箱中CO₂濃度。并參考以下培養體系：

① DMEM由1.5 g/L碳酸氫鈉(na)配制(zhi)而(er)成，使(shi)用5% CO₂培養(yang)箱。

② DMEM由(you)3.7 g/L碳酸氫鈉(na)配制而成(cheng)，使用10% CO₂培(pei)養(yang)箱。

當(dang)使用碳酸氫鈉含量高的培養(yang)基(ji)時，必(bi)須將這些細胞在10% CO₂中(zhong)孵育，以(yi)便(bian)正確(que)緩(huan)沖培養(yang)基(ji)。當培養(yang)基(ji)沒有適當緩(huan)沖時，293T細胞雖(sui)然可以存活，但將無法粘附并保持漂浮在培養(yang)基中(zhong)。

5．培(pei)養時可酌情使用預(yu)鋪(pu)0.2%明膠的培養瓶(ping)/培養皿，若細胞狀態好，可省略此步驟。

6．本細胞(bao)僅用(yong)于科學研(yan)究，不得(de)用(yong)于臨床治療。

7．請注意無(wu)菌操(cao)作，避免(mian)污染。