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293T，HEK-293T，人胚(pei)腎(shen)細胞

Human Embryonic Kidney 293T

產品(pin)貨(huo)號：JY03041      規格：> 1×10? cells（T25瓶/1mL凍存(cun)管）     銷(xiao)售價格(ge)：￥ 600

293T 說明書.pdf

細胞簡介

人(ren)胚腎細胞株293插入SV40 T-抗原(yuan)基因后產生的(de)高(gao)轉染效率的(de)衍生株稱為293T。該細胞最初(chu)的名字293tsA1609neo，攜帶SV40復制序列，被廣泛用于(yu)逆轉錄病毒(du)生產、基因表(biao)達和蛋白(bai)表(biao)達。

運輸和保存

1．1 mL凍存管包裝干冰運輸，收貨后-80℃冰(bing)箱保(bao)存(cun)過(guo)夜后(hou)轉(zhuan)入液(ye)氮或直接復蘇(su)。若發現(xian)干冰(bing)已經揮發干凈、凍(dong)存(cun)管蓋(gai)脫落(luo)、破損及細胞(bao)有(you)污染，請立即與我們(men)聯(lian)系(xi)。

2．T25瓶(ping)培(pei)養(yang)的(de)(de)細胞(bao)常溫發貨，收到后按照細胞(bao)接收后的(de)(de)處理方法操(cao)作。

培(pei)養瓶細胞接收(shou)后的處理

1．收到細胞(bao)后，75%酒精消毒瓶壁，拆下封(feng)口膜，放入37℃，5% CO₂培(pei)養箱中(zhong)靜置3-4 h，以穩定細胞狀態。若發(fa)現培(pei)養瓶破損、有(you)(you)液體(ti)(ti)溢出(chu)及細胞有(you)(you)污染，請拍照后(hou)及時聯系我們。

2．請在顯微鏡下確認細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，同時給(gei)剛(gang)收到的細(xi)胞拍照，10倍(bei)和20倍(bei)各2-3張以及(ji)培養瓶外觀照片一張留存，作為售(shou)后依據。

3．細胞收貨脫落：293T細(xi)(xi)胞貼(tie)壁能力(li)弱，收貨如有大面積脫落的細(xi)(xi)胞團為正常現象。若(ruo)細胞在快(kuai)遞運(yun)輸途中因振動脫落，先將培養瓶放入37℃，5%CO₂培養(yang)箱中(zhong)靜置3-6 h，讓少數脫落的細胞可(ke)再附著生長。若仍(reng)有脫落聚集(ji)的細胞，則 (1) 收(shou)集所有細胞懸(xuan)液，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，保留沉(chen)淀；(2) 添加胰蛋(dan)白酶(mei)消化液0.5 mL至離心管中，重懸沉淀，置于37℃消化(hua)1-2 min左右；(3) 向離(li)心管內加入5 mL完(wan)全培養基終止消化(hua)；(4) 1000 rpm，離(li)心5 min，丟棄上清(qing)，用5 mL完全培養(yang)基（補(bu)加1-5% FBS，促進貼壁(bi)）重懸沉(chen)淀(dian)，接種于新的培養瓶內；(5) 待細胞(bao)完(wan)全貼壁(bi)后，培養(yang)觀(guan)察；之(zhi)后按照(zhao)換(huan)液頻率更(geng)換(huan)新鮮(xian)的(de)完(wan)全培養(yang)基(ji)。

4．收(shou)貨(huo)細胞(bao)(bao)的(de)培養(yang)和傳代：在顯微鏡下(xia)觀察細胞(bao)(bao)生(sheng)長狀態(tai)，若細胞(bao)(bao)生(sheng)長密度(du)在60%以下，可去除培(pei)(pei)養瓶中的(de)灌液培(pei)(pei)養基，加入新配制的(de)完(wan)全培(pei)(pei)養基，置于(yu)培(pei)(pei)養箱中繼(ji)續培(pei)(pei)養。若(ruo)細(xi)胞生長密度達80%-90%以(yi)上(shang)，可以(yi)對細胞進行傳(chuan)代處理。

5．運輸用的培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基（灌液培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)）不能再用來(lai)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)細胞(bao)，請(qing)換用合適(shi)的新鮮(xian)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)基來(lai)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)細胞(bao)。

凍(dong)存(cun)細胞接收后(hou)的處(chu)理

收貨后-80℃冰(bing)箱(xiang)保存過夜后轉入(ru)液氮(dan)或直接復蘇(su)。

細胞(bao)復蘇：將含有1 mL細胞懸液(ye)的凍存管(guan)置(zhi)于37℃水浴中迅速搖晃(huang)解凍，回溫(wen)后噴(pen)以75 %酒精并擦拭(shi)之，移入無(wu)菌操作臺內。將凍存管中細胞加(jia)入到(dao)含4-6 mL完全培養基的離(li)心管(guan)中(zhong)混合均勻。1000 rpm離心3-5 min，棄去上清液，完全培養(yang)基(ji)重懸(xuan)(xuan)細(xi)胞。然后將細(xi)胞懸(xuan)(xuan)液加(jia)入(ru)培養(yang)瓶/培(pei)養皿中(zhong)(zhong)，培(pei)養箱中(zhong)(zhong)孵育。第二(er)天顯(xian)微鏡下觀察細胞(bao)生長情況和細胞(bao)密度。

培養信息

293T培(pei)養注意事(shi)項(xiang)

1．293T貼(tie)壁能力較(jiao)弱，加液(ye)、換液(ye)、洗滌時，須(xu)動(dong)作輕柔，避免用液(ye)體直沖細胞(bao)(bao)，會造成細胞(bao)(bao)脫(tuo)落。細胞(bao)(bao)生長不能過密，過密細胞(bao)(bao)容易脫(tuo)落，脫(tuo)落下(xia)來(lai)的細胞(bao)(bao)可(ke)以通過離心收集，使用胰(yi)酶消(xiao)化后繼續培養。

2．293T細(xi)胞(bao)狀態(tai)直接(jie)影響(xiang)病毒(du)包裝(zhuang)(zhuang)效率。當(dang)細(xi)胞(bao)傳(chuan)代次數過多(duo)、細(xi)胞(bao)增殖速度減緩、細(xi)胞(bao)貼壁能力非(fei)常弱（輕(qing)柔換液(ye)也能導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)半數脫落）時(shi)，說(shuo)明細(xi)胞(bao)狀態(tai)不好，會大幅降低病毒(du)包裝(zhuang)(zhuang)效率。

3．使(shi)用高糖DMEM培養293T，低糖(tang)DMEM或者(zhe)DMEM/F12等含糖(tang)量低的培(pei)養基(ji)可能影響(xiang)293T細胞的生長狀態。

4．如果發生293T細胞(bao)不貼壁，漂浮在培養基中的(de)(de)現象(xiang)，請確認(ren)所使(shi)用(yong)的(de)(de)DMEM中碳(tan)酸氫鈉濃度(du)及(ji)培養箱中CO₂濃度。并(bing)參(can)考以下培養體(ti)系：

① DMEM由(you)1.5 g/L碳(tan)酸氫鈉配制(zhi)而(er)成(cheng)，使用5% CO₂培養箱(xiang)。

② DMEM由(you)3.7 g/L碳酸氫鈉(na)配制而成，使(shi)用10% CO₂培養箱。

當(dang)使用碳酸氫鈉含量(liang)高(gao)的培養基時(shi)，必須將這些(xie)細胞(bao)在10% CO₂中孵育(yu)，以便正確緩(huan)沖培養(yang)基(ji)(ji)。當(dang)培養(yang)基(ji)(ji)沒有適當(dang)緩(huan)沖時，293T細胞雖然可以存活，但將無(wu)法(fa)粘附并保(bao)持漂浮在培養基中。

5．培養時可酌情使用預鋪0.2%明膠的(de)培養瓶(ping)/培養皿，若細胞(bao)狀態好(hao)，可省(sheng)略(lve)此步驟(zou)。

6．本細胞僅(jin)用于科學研究，不(bu)得用于臨床治療。

7．請注(zhu)意無菌操作，避免污(wu)染。