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293T，HEK-293T，人(ren)胚腎細胞

Human Embryonic Kidney 293T

產品貨號：JY03041      規格：> 1×10? cells（T25瓶/1mL凍(dong)存管(guan)）     銷售價(jia)格：￥ 600

293T 說明書(shu).pdf

細(xi)胞簡介

人胚腎(shen)細胞株(zhu)293插入SV40 T-抗(kang)原基因后產生(sheng)的高(gao)轉染效率(lv)的衍(yan)生(sheng)株稱為293T。該細胞(bao)最初(chu)的名字293tsA1609neo，攜帶(dai)SV40復(fu)制序列，被廣泛用(yong)于逆(ni)轉錄(lu)病毒生產、基因表達(da)和蛋(dan)白表達(da)。

運輸和(he)保存

1．1 mL凍存(cun)管(guan)包裝干(gan)冰運輸，收(shou)貨后(hou)-80℃冰箱保存(cun)過夜后(hou)轉入液氮或直接復蘇。若發現干(gan)冰已經揮(hui)發干(gan)凈、凍(dong)存(cun)管蓋(gai)脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lian)系(xi)。

2．T25瓶培養(yang)的細(xi)胞(bao)常溫發貨(huo)，收到后按照細(xi)胞(bao)接(jie)收后的處理(li)方法操作(zuo)。

培(pei)養瓶細胞接收后的處理

1．收到細(xi)胞后，75%酒精消(xiao)毒瓶壁，拆下封(feng)口(kou)膜，放入37℃，5% CO₂培養箱中靜置3-4 h，以穩定細(xi)(xi)胞狀態。若發(fa)現培養瓶破損、有液(ye)體(ti)溢出(chu)及(ji)細(xi)(xi)胞有污染，請拍(pai)照后及(ji)時聯系我們。

2．請在顯微鏡下確認細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，同時(shi)給(gei)剛收到的細胞(bao)拍照，10倍和20倍各2-3張(zhang)以及培(pei)養瓶外觀照片一張(zhang)留存，作為售(shou)后依(yi)據(ju)。

3．細(xi)胞收貨脫落：293T細胞貼(tie)壁能(neng)力弱，收貨如(ru)有大面積(ji)脫落(luo)的細胞團為正常現象。若細胞在(zai)快(kuai)遞運輸途中因振動脫落(luo)，先將(jiang)培養瓶放入37℃，5%CO₂培養箱中(zhong)靜置3-6 h，讓少數脫落(luo)(luo)的(de)細胞(bao)可再附著生長(chang)。若仍有脫落(luo)(luo)聚集的(de)細胞(bao)，則 (1) 收集所(suo)有細(xi)胞懸液，1000 rpm離(li)心5 min，保留沉淀；(2) 添加胰蛋白酶消化液0.5 mL至離心管中，重懸(xuan)沉淀，置于(yu)37℃消化1-2 min左右；(3) 向離心管內加入(ru)5 mL完(wan)全(quan)培養基(ji)終(zhong)止消化；(4) 1000 rpm，離(li)心(xin)5 min，丟棄上清，用5 mL完全培養基（補加1-5% FBS，促進貼(tie)壁）重懸沉淀，接種于新的培養瓶內；(5) 待細胞完全(quan)貼壁后，培(pei)養(yang)觀察；之(zhi)后按照換液(ye)頻率(lv)更換新(xin)鮮的完全(quan)培(pei)養(yang)基(ji)。

4．收貨細胞(bao)的(de)培養和傳代(dai)：在(zai)(zai)顯微鏡下觀察(cha)細胞(bao)生長狀態，若(ruo)細胞(bao)生長密度在(zai)(zai)60%以下，可去(qu)除培(pei)養瓶中(zhong)的(de)灌液培(pei)養基，加入新配制的(de)完(wan)全(quan)培(pei)養基，置于培(pei)養箱中(zhong)繼續培(pei)養。若細胞生長密(mi)度達80%-90%以上，可以對細(xi)胞進行傳代(dai)處(chu)理。

5．運輸用的培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)（灌液培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)）不能再用來培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)細胞，請換用合(he)適(shi)的新(xin)鮮培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)基(ji)來培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)細胞。

凍存(cun)細胞接收(shou)后的(de)處理

收貨后-80℃冰箱保存過(guo)夜(ye)后轉入液(ye)氮或直接復蘇。

細胞(bao)復蘇(su)：將含有1 mL細胞懸液的凍(dong)存管置于(yu)37℃水浴(yu)中迅(xun)速搖晃解凍，回溫后(hou)噴以75 %酒(jiu)精(jing)并擦(ca)拭之，移入(ru)無菌操(cao)作(zuo)臺內。將凍存管中細胞(bao)加入(ru)到含4-6 mL完(wan)全培養基的離心(xin)管中混合均勻(yun)。1000 rpm離心3-5 min，棄去上清(qing)液，完全培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan)細胞。然后(hou)將細胞懸(xuan)液加入(ru)培(pei)養(yang)瓶/培養皿中(zhong)，培養箱中(zhong)孵育(yu)。第二天顯微鏡(jing)下觀察細(xi)胞生長情(qing)況(kuang)和細(xi)胞密度。

培養信(xin)息

293T培養注意事項

1．293T貼壁能力較弱，加液、換液、洗滌(di)時，須(xu)動作(zuo)輕柔，避免用(yong)液體直沖細(xi)(xi)(xi)胞，會造成(cheng)細(xi)(xi)(xi)胞脫落。細(xi)(xi)(xi)胞生長不能過密，過密細(xi)(xi)(xi)胞容易脫落，脫落下來的細(xi)(xi)(xi)胞可以通過離(li)心收(shou)集(ji)，使用(yong)胰酶消化后(hou)繼續培養。

2．293T細(xi)(xi)胞(bao)(bao)狀(zhuang)態直接影響病毒(du)包裝效率。當細(xi)(xi)胞(bao)(bao)傳代次數(shu)過多、細(xi)(xi)胞(bao)(bao)增(zeng)殖速度減緩、細(xi)(xi)胞(bao)(bao)貼壁能(neng)力非常弱(ruo)（輕柔換液也能(neng)導致細(xi)(xi)胞(bao)(bao)半(ban)數(shu)脫(tuo)落）時(shi)，說(shuo)明細(xi)(xi)胞(bao)(bao)狀(zhuang)態不好(hao)，會(hui)大幅降低病毒(du)包裝效率。

3．使用(yong)高糖DMEM培養293T，低(di)糖DMEM或者(zhe)DMEM/F12等含糖量低的(de)培養基可能(neng)影響293T細(xi)胞的生(sheng)長狀態。

4．如果發生293T細胞不(bu)貼壁(bi)，漂(piao)浮(fu)在(zai)培養基(ji)中的(de)現(xian)象，請(qing)確認所使(shi)用的(de)DMEM中(zhong)碳酸(suan)氫鈉濃度及培(pei)養箱中(zhong)CO₂濃度。并參考以(yi)下培養體(ti)系：

① DMEM由1.5 g/L碳酸氫(qing)鈉配制而(er)成，使用5% CO₂培養箱。

② DMEM由3.7 g/L碳酸氫鈉配制(zhi)而成，使(shi)用10% CO₂培養(yang)箱。

當使(shi)用碳(tan)酸氫鈉含量高(gao)的培養基時，必(bi)須將這些細胞(bao)在(zai)10% CO₂中孵育，以便正確緩(huan)沖培(pei)養(yang)基(ji)。當培(pei)養(yang)基(ji)沒有適當緩(huan)沖時，293T細(xi)胞雖然可以(yi)存活，但將(jiang)無法粘附(fu)并保持漂(piao)浮在培養基中(zhong)。

5．培養時可(ke)酌情(qing)使用(yong)預鋪0.2%明膠(jiao)的培(pei)養瓶(ping)/培養(yang)皿，若細胞狀態好，可(ke)省略此步驟。

6．本細胞僅(jin)用于科學研究，不得(de)用于臨床治療。

7．請注(zhu)意無菌操作(zuo)，避免(mian)污染。