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293T，HEK-293T，人(ren)胚腎細胞

Human Embryonic Kidney 293T

產(chan)品貨號(hao)：JY03041      規(gui)格：> 1×10? cells（T25瓶/1mL凍存(cun)管）     銷(xiao)售價格：￥ 600

293T 說明書(shu).pdf

細胞(bao)簡介

人胚腎細胞株293插入SV40 T-抗原基因(yin)后產生的高轉(zhuan)染效率的衍生株稱為293T。該細胞(bao)最初(chu)的(de)名(ming)字293tsA1609neo，攜帶SV40復制序列(lie)，被(bei)廣泛用于逆轉錄病毒生產、基因表達和蛋(dan)白(bai)表達。

運輸(shu)和保存

1．1 mL凍存管包裝(zhuang)干冰運輸，收貨后-80℃冰(bing)箱保存(cun)過夜后轉入液氮或直接復蘇。若發(fa)(fa)現干冰(bing)已經(jing)揮(hui)發(fa)(fa)干凈(jing)、凍存(cun)管蓋脫(tuo)落、破損及細(xi)胞有污染(ran)，請立即與(yu)我們聯系。

2．T25瓶培養的細(xi)(xi)胞常(chang)溫發貨，收到后按照細(xi)(xi)胞接收后的處理方(fang)法(fa)操作。

培(pei)養瓶細(xi)胞接收后的(de)處理

1．收到細胞后，75%酒精消毒(du)瓶(ping)壁，拆下封(feng)口膜(mo)，放(fang)入37℃，5% CO₂培養箱(xiang)中靜置3-4 h，以穩定(ding)細(xi)胞(bao)狀態。若發現培養瓶破損、有液(ye)體溢出及(ji)細(xi)胞(bao)有污染，請拍照后及(ji)時聯系我們(men)。

2．請(qing)在顯微鏡下(xia)確認細胞狀態，同(tong)時給剛收到的細胞拍照，10倍(bei)和20倍各2-3張以及培養瓶外觀照(zhao)片一張留存(cun)，作為售后依據。

3．細胞(bao)收貨(huo)脫落：293T細胞貼壁能力弱，收(shou)貨如有大(da)面積脫(tuo)落的(de)細胞團為(wei)正常現象。若細(xi)胞在快遞運輸(shu)途中因(yin)振動脫落，先(xian)將(jiang)培(pei)養(yang)瓶放入37℃，5%CO₂培養箱中靜置(zhi)3-6 h，讓少數脫落的細胞(bao)(bao)可再附(fu)著生長。若仍有脫落聚集的細胞(bao)(bao)，則 (1) 收集所有細胞(bao)懸液，1000 rpm離心(xin)5 min，保留沉淀；(2) 添(tian)加胰蛋白酶(mei)消化液0.5 mL至(zhi)離心管中，重懸沉淀，置于37℃消化1-2 min左右；(3) 向離心管內加入(ru)5 mL完全(quan)培養基終止消化(hua)；(4) 1000 rpm，離心5 min，丟(diu)棄(qi)上清，用5 mL完全培(pei)養(yang)基（補加1-5% FBS，促(cu)進貼壁）重(zhong)懸沉(chen)淀，接種于(yu)新的培養瓶內；(5) 待(dai)細胞完全貼壁后(hou)，培養(yang)觀察；之后(hou)按(an)照換(huan)液(ye)頻率更(geng)換(huan)新鮮(xian)的完全培養(yang)基(ji)。

4．收貨細(xi)(xi)胞的(de)培養和傳代：在顯微鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)(xi)胞生(sheng)長(chang)(chang)狀態，若細(xi)(xi)胞生(sheng)長(chang)(chang)密度在60%以下，可去除培(pei)(pei)養(yang)(yang)瓶中的(de)灌液培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)，加(jia)入(ru)新配制的(de)完(wan)全(quan)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)，置(zhi)于培(pei)(pei)養(yang)(yang)箱中繼續(xu)培(pei)(pei)養(yang)(yang)。若細(xi)胞生長密度達80%-90%以(yi)上，可以(yi)對(dui)細(xi)胞進行傳(chuan)代(dai)處理。

5．運輸用的培(pei)養(yang)基(ji)（灌(guan)液培(pei)養(yang)）不能再用來培(pei)養(yang)細(xi)胞，請換用合適的新鮮培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細(xi)胞。

凍存(cun)細(xi)胞(bao)接收后的處理

收貨后-80℃冰(bing)箱保存過夜后轉入液氮或直接(jie)復蘇。

細胞復蘇：將(jiang)含有1 mL細胞(bao)懸液的凍存管置于37℃水浴中迅速搖(yao)晃解凍，回(hui)溫后噴以75 %酒(jiu)精(jing)并擦拭(shi)之，移(yi)入(ru)無菌(jun)操(cao)作(zuo)臺內。將凍存管中細胞加入(ru)到含4-6 mL完全培養基的(de)離心管中混合(he)均勻(yun)。1000 rpm離心(xin)3-5 min，棄去上清(qing)液(ye)(ye)，完全培養基(ji)重(zhong)懸(xuan)細胞。然后將細胞懸(xuan)液(ye)(ye)加入培養瓶/培(pei)養(yang)皿中，培(pei)養(yang)箱中孵(fu)育(yu)。第二(er)天顯微鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞(bao)生長(chang)情況和細(xi)胞(bao)密度。

培養信息(xi)

293T培養注(zhu)意事項(xiang)

1．293T貼(tie)壁能(neng)力較弱，加(jia)液(ye)、換液(ye)、洗滌時，須動(dong)作(zuo)輕柔，避免用液(ye)體直沖(chong)細(xi)胞，會造(zao)成細(xi)胞脫落。細(xi)胞生長不能(neng)過(guo)密(mi)，過(guo)密(mi)細(xi)胞容易脫落，脫落下來的(de)細(xi)胞可以(yi)通過(guo)離(li)心收(shou)集，使用胰酶消化(hua)后繼續培養(yang)。

2．293T細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)狀(zhuang)態(tai)直接影響病毒(du)包(bao)裝(zhuang)效率。當細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)傳代次(ci)數(shu)過多(duo)、細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)增(zeng)殖(zhi)速度(du)減緩、細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)貼壁能力非常(chang)弱（輕柔換液也能導(dao)致細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)半(ban)數(shu)脫落(luo)）時，說明細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)狀(zhuang)態(tai)不好，會大幅降低病毒(du)包(bao)裝(zhuang)效率。

3．使用高糖DMEM培養293T，低糖DMEM或(huo)者DMEM/F12等含(han)糖量低的(de)培養基可能影響293T細胞的生長狀態。

4．如果(guo)發生293T細胞不貼壁，漂浮(fu)在培(pei)養(yang)基中的(de)現象(xiang)，請確(que)認所使用(yong)的(de)DMEM中碳酸(suan)氫鈉濃度及培養箱(xiang)中CO₂濃度。并(bing)參考以下培養體(ti)系：

① DMEM由1.5 g/L碳酸氫鈉配制而(er)成(cheng)，使用5% CO₂培養箱。

② DMEM由3.7 g/L碳酸(suan)氫鈉配制而成，使用10% CO₂培養箱。

當使用碳酸氫鈉含量高的培(pei)養(yang)基時(shi)，必須將這些細胞在10% CO₂中孵育，以便正確緩(huan)沖培養基。當培養基沒有適(shi)當緩(huan)沖時，293T細(xi)胞雖然(ran)可(ke)以存(cun)活，但將無(wu)法粘附并保持漂浮在培養基中(zhong)。

5．培養時(shi)可酌(zhuo)情使用(yong)預(yu)鋪0.2%明膠(jiao)的培(pei)養瓶/培養皿，若細胞狀態好(hao)，可省略此步驟(zou)。

6．本(ben)細胞僅用于(yu)科(ke)學研究，不得用于(yu)臨(lin)床治療(liao)。

7．請注意無菌操作，避免污(wu)染。